Protocole de culture et de screening en plaques pour les cellules de mammifères et d'insectes
Les plaques représentent une section transversale de plaques pour différents types de tests, de croissance cellulaire et de stockage. Nous proposons plusieurs formats : 96 et 24 puits pour s'adapter à vos besoins.
Protocole pour le screening de cellules de mammifères et d'insectes - Plaques 96 puits :
Matériel :
Méthode :
1. Maintenir les stocks de cellules dans un milieu de croissance approprié. Diviser les cultures le jour avant la transfection à une densité appropriée pour assurer la croissance de la phase logarithmique au moment de la transfection.
2. Mettre 500 ul / puits de suspension cellulaire. La densité de semis optimale dépend de la lignée cellulaire, veuillez utiliser la densité recommandée pour la lignée cellulaire utilisée.
3. Transfecter les cellules selon le protocole de transfection établi. Établir le ratio Réactif de transfection / ADN / nutriments à partir de ce qui est utilisé pour les cultures à plus grande échelle.
4. Scellez les plaques avec des couvercles en plastique ou des joints d'étanchéité et transférez-les dans un shaker pendant la nuit à 800 tr / min et à 37 ° C.
5. Récolter les cellules au moment établi pour les cultures à plus grande échelle. Faire un culot cellulaire par centrifugation à 2500 g pendant 20 min à 4 ° C.
6. Réserver le milieu de culture ou le culot en fonction de l'application et procéder au traitement en aval.
Notes :
- Le facteur le plus critique de la viabilité cellulaire est l'aération. Des résultats optimaux seront obtenus en utilisant des agitateurs avec des diamètres d'orbite de 3 mm. Nous ne recommandons pas de travailler en plaques 96 puits en utilisant des agitateurs avec des diamètres standard de 25 mm.
- Les plaques de filtration Thomson sont un excellent produit complémentaire pour les applications de purification en aval.
Centrifugation maximale suggérée: 3000 g.
Protocole pour le screening de cellules de mammifères et d'insectes - Plaques 24 puits :
Matériel :
Méthode :
1. Maintenir les stocks de cellules dans un milieu de croissance approprié. Diviser les cultures le jour avant la transfection à une densité appropriée pour assurer la croissance de la phase logarithmique au moment de la transfection.
2. Mettre 4-5 ml / puits de suspension cellulaire. La densité de semis optimale dépend de la lignée cellulaire, veuillez utiliser la densité recommandée pour la lignée cellulaire utilisée.
3. Transfecter les cellules selon le protocole de transfection établi. Établir le ratio Réactif de transfection / ADN / nutriments à partir de ce qui est utilisé pour les cultures à plus grande échelle.
4. Scellez les plaques avec des couvercles en plastique ou des joints d'étanchéité et transférez-les dans un shaker pendant la nuit à 800 tr / min et à 37 ° C.
5. Récolter les cellules au moment établi pour les cultures à plus grande échelle. Faire un culot cellulaire par centrifugation à 2500 g pendant 20 min à 4 ° C.
6. Réserver le milieu de culture ou le culot en fonction de l'application et procéder au traitement en aval.
Notes :
- Le facteur le plus critique de la viabilité cellulaire est l'aération. Des résultats optimaux seront obtenus en utilisant des agitateurs avec des diamètres d'orbite de 3 mm. Nous ne recommandons pas de travailler en plaques 96 puits en utilisant des agitateurs avec des diamètres standard de 25 mm.
- Les plaques de filtration Thomson sont un excellent produit complémentaire pour les applications de purification en aval.