Tétramères - Humains - Classe I
Les récepteurs des lymphocytes T (TCR) exprimés à la surface des lymphocytes T reconnaissent spécifiquement et se lient aux complexes des molécules du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) et des fragments peptidiques. Les lymphocytes T CD8 +, également appelés lymphocytes T cytotoxiques (CTL), reconnaissent des complexes de molécules et de peptides de classe I du CMH. Les CTL tuent directement les cellules cibles, y compris les cellules infectées par le virus et les cellules cancéreuses.
Préparation de réactifs tétramères de classe I du CMH
Les réactifs tétramères de classe I du CMH sont générés principalement par la méthode développée par Altman et al., qui a démontré que les tétramères des complexes CMH de classe I / peptide pouvaient être utilisés comme sondes pour la détection et la quantification des CTL spécifiques de l'antigène (Science 1996, 274: 94 -96)
Une chaîne lourde de CMH de classe I recombinante exprimée par E. coli et une ß2-microglobuline (ß2m) sont repliées en présence d'un antigène peptidique pour générer un complexe monomère / peptide MHC de classe I soluble (monomère). Le monomère est ensuite biotinylé par l'enzyme biotine ligase, BirA, au niveau d'un résidu de lysine présent dans la séquence de biotinylation qui a été ajoutée à l'extrémité C-terminale de la chaîne lourde du CMH de classe I. Le monomère biotinylé est purifié par chromatographie sur colonne. Les monomères biotinylés purifiés sont tétramérisés par mélange avec une streptavidine marquée par fluorescence pour produire des réactifs de tétramère du CMH.
