Mix SYBR Green pour RT-qPCR

Le SYBR Green est un composé organique aromatique de formule chimique C32H37N4S faisant partie des cyanines asymétriques (fluorophores). Il a la capacité de se lier aux acides nucléiques et d'émettre une fluorescence. Il est de ce fait utilisé en biologie moléculaire comme agent fluorescent, notamment lors de la réalisation de PCR quantitatives.

Le SYBR Green est le colorant le plus couramment utilisé pour la détection non spécifique. Le SYBR green I est une molécule pouvant se fixer sur tous les types d'acides nucléiques doubles brins. Ce n'est pas un agent intercalant : par définition, un agent intercalant est une molécule pouvant s'insérer entre les plateaux formés par les bases appariées d'un acide nucléique ; le SYBR green ne répond pas à cette définition puisqu'il se lie au petit sillon de l'ADN. Une fois fixé, il devient un très bon fluorophore. Ainsi, le complexe ADN double brin/SYBR green I absorbe la lumière bleue (λmax = 497 nm) et émet de la lumière verte (λmax = 520 nm). La fluorescence émise peut être détectée et liée à la quantité de cible.

Certains instruments de PCR en temps réel nécessitent un colorant de référence interne pour la normalisation du signal fluorescent et la correction des variations optiques de puits à puits. La variation de la fluorescence peut résulter de la conception de l'instrument. Le colorant de référence passif ROX est un additif inerte qui fournit un signal fluorescent constant pour la normalisation de l'échantillon tout au long du test qPCR en temps réel.