Les gels précoulés SDS sont optimisés pour l'électrophorèse sur gel de dodécyl sulfate de sodium et de polyacrylamide (SDS-PAGE), une technique qui dénature les protéines en chaînes linéaires recouvertes de molécules de SDS chargées négativement. Ce processus masque les charges intrinsèques des protéines, ce qui permet une séparation basée uniquement sur le poids moléculaire. Le système de tampon discontinu - composé de chlorure (ions de tête) et de glycinate (ions de queue) - crée un gradient de tension qui « empile » les protéines en bandes nettes avant de les résoudre dans une matrice de polyacrylamide aux pores plus petits. Les gels précoulés éliminent les étapes de préparation manuelle, garantissant des tailles de pores constantes et réduisant la variabilité inhérente aux systèmes coulés à la main.
Avancées Techniques dans les Systèmes Précoulés
Les gels précoulés SDS modernes intègrent des innovations telles que des formulations d'acrylamide en gradient (par exemple, 4-20 %) pour une résolution large du poids moléculaire et des tampons à base de Bis-Tris pour une meilleure netteté des bandes. Contrairement aux systèmes Tris-glycine traditionnels, les gels Bis-Tris fonctionnent à un pH neutre, ce qui réduit la dégradation des protéines et permet des temps d'exécution plus courts.
Applications et Optimisation du Flux de Travail
Les gels SDS précoulés sont essentiels pour le Western blotting, la spectrométrie de masse et la quantification des protéines. Leurs formulations standardisées réduisent la variabilité entre les gels, garantissant ainsi des résultats reproductibles d'une expérience à l'autre. Des protocoles récents mettent en avant l'utilisation de tampons réfrigérés (4°C) et l'électrophorèse à haute tension (150-200 V) pour accélérer les séparations tout en maintenant la résolution. Les systèmes précoulés minimisent également l'exposition aux monomères d'acrylamide neurotoxiques et au TEMED, répondant ainsi aux problèmes de sécurité associés à la coulée manuelle.
Innovations Récentes et Performances
Les méthodologies émergentes intègrent des conceptions à haut débit, permettant l'analyse simultanée de plusieurs échantillons. Par exemple, des compositions optimisées de tampons avec des concentrations réduites de SDS (0,0375 %) et des formulations sans EDTA préservent les protéines liant les métaux pendant l'électrophorèse. Les systèmes photo-initiateurs avancés, tels que les gels polymérisés aux UV, rationalisent davantage les flux de travail en éliminant les catalyseurs toxiques tels que le persulfate d'ammonium (APS).
